養細胞是醫學研究生的基本功。我養過骨髓MSC、心肌細胞、心肌成纖維細胞、AD293腺病毒包裝細胞、PA317逆轉錄病毒包裝細胞。養得**多的是MSC。有三個小經驗和大家分享一下：

1. 不要燒瓶口。大多數人都喜歡在酒精燈的火焰上關瓶子，覺得這樣可以避免污染。不知道大家是不是有培養基怎么越用越發紫的困惑？知道為什么嗎？燒瓶口燒的。培養基一般都是用碳酸/碳酸氫跟作緩沖體系。瓶口在火焰上的時候，熾熱的空氣進入瓶內。塞緊塞子放入冰箱后，空氣變冷，壓力驟降，培養基中的碳酸就會轉化成二氧化碳，釋放出來。培養基中的碳酸少了，當然會變堿。如果不燒瓶口的話，你會發現培養液變堿的速度會大大減慢。（當然多多少少還是會有一點越用越堿，因為室溫還是比冰箱內的溫度高）

其實燒瓶口防止污染純粹是心理安慰。不妨試一下把手指在火上晃幾下，你會發現根本就不會燒疼。如果有細菌的話，這么晃兩下也燒不死多少。要想燒死全部細菌，除非把瓶口和塞子燒紅。我在G內從來就不燒瓶口。來美G以后發現這里更徹底，超凈臺內根本就不點酒精燈。

2. 不要頻繁看細胞。對于初學者而言，養細胞就像養孩子一樣，有空就要去看看。細胞越是養不好，就越是經常去看。實際上看細胞對細胞的生長沒有任何好處，特別是對原代細胞或是免疫磁珠分選后，密度特別低的細胞。培養基中的生長因子是非常有限的。細胞好不容易自分泌一點兒促生長的因子在其周圍，形成有利于生長的局部環境。你跑去看細胞，培養瓶這么一晃，把因子都給晃散了。經常可以看到新手**到晚都在看細胞，細胞老是長不好。老手細胞一扔好幾天不管，細胞瘋長。

3. 不要怕消化。在傳代的時候，初學者往往生怕細胞消化過度，早早地終止消化。細胞沒下來就使勁吹燈，吹得滿瓶子都是氣泡。在我看來，用力吹打對細胞的損傷比消化更大。我師兄在做血管平滑肌原代的時候，37度消化過夜，細胞也沒事。我一般是等細胞完全變圓后才中止消化。細胞輕輕一晃就能下來。還有，動作要輕柔，盡量不要產生氣泡。氣泡在破裂時的機械應力相當大，對細胞的傷害也是很大的。
 
 
 
1. 不要燒瓶口？

燒瓶口不僅僅是為了燒掉細菌，他的意義還有瓶口溫度升高，使瓶子內形成向上的氣流，防止細菌隨空氣流進瓶子內，還有弄干瓶口（殘留在瓶口附近的培養液容易引起細菌繁殖-污染）

2. 不要頻繁看細胞？

我不是很清楚，一般來說，血清里面不是有生長因子嗎？而且，他的影響應該大于細胞自身分泌的因子。

3. 不要怕消化？

這個和細胞的類型關系非常大。很多細胞非常脆弱，很怕消化的。