【摘要】 二氧化碳培養箱提供了細胞生長環境, 為了正確使用, 根據它的結構和性能要求, 介紹培養箱正確使用方法、常見故障的預防和處理。
 
【關鍵詞】 二氧化碳; 設備和供應; 維修

 多數細胞培養時需 37 ℃、5 %CO2 張力和飽和濕度的生長條件, CO2培養箱提供了細胞生長環境。 目前G內生物研究室多數使用的是熱導型培養箱, 每臺 4.5 萬～ 5 .5 萬元, 使用壽命 10 年。 從中南地區和我校報廢維修資料看, 平均使用壽命是 6.5 年, 其主要原因是傳感器損壞。 CO2培養箱價格昂貴,我們期望它按期或過期服役, 為正確使用, 根據它的結構和性能要求, 現介紹培養箱的正確使用方法、常見故障的預防和處理。
1.溫度傳感器保護:培養箱溫度由溫度傳感器控制, 它的正常運行需要 25 ℃室溫條件。 常規使用時, 箱內放 1 ～ 2 支水銀溫度計作為溫度對照。 溫度傳感器的正確運行, 使設定溫度數、箱面顯示數和箱內溫度三者一致。 當室溫高于 30 ℃時, 溫度傳感器調節功能失靈, 出現箱面顯示溫度高于設定數, 箱內溫度又高于箱面溫度, 并常伴隨警告聲。 此現象發生在白天,降低室溫, 培養箱溫度恢復正常運行。 若發生在晚上, 持續高溫使細胞死亡。 為避免這一現象發生, 夏季使用培養箱時, 無菌室應保持 25 ℃左右室溫。
2.氣體傳感器保護:箱內氣壓由 CO2  氣體傳感器控制。
CO 2 傳感器正常反饋要求進氣壓為 0 .06 兆帕。 開門后, 箱內氣體丟失, CO2 壓力下降。 關門后, CO 2 傳感器在低壓刺激下有節奏地開閉, 向箱內慢慢充氣, 當進氣壓達 0 .06 兆帕時, 自動停止調節。 換氣瓶時, 部分實驗者針對進氣壓, 采用加大進氣壓的快速充氣法, 使用 0.1 兆帕甚** 0 .2 兆鉑壓力, 無形中損傷了 CO2 傳感器。 開始這種損傷效應不能顯示, 實驗者不能察覺, 反復錯誤操作, CO 2 傳感器損傷累積**終致命損壞, 使氣壓調節失靈。 當實驗者發現培養基顏色變化異常、細胞生長緩慢時, 已無法挽救損壞。 1 個氣體傳感器需 1 .6 萬元, 更換 1個也不易。 因此, CO2  傳感器壽命與 CO 2 進氣壓大小有關, 只要做好進氣壓調節, 就能保護 CO2  傳感器性能。 為做好進氣壓調節, 現將氣壓調節歸納為 4 句話 17 個字:反時針松捍, 接氣瓶, 順時針減壓, 進氣壓 0.06 。 安民告示, 張貼箱門, 使每個實驗者都會操作。 為防止漏氣, 在氣瓶出口處填膠皮, 氣壓表接頭處纏封口帶, 氣瓶與氣壓表連接后, 肥皂水試驗, 接口無氣泡出現為連接合格。
3.CO 2 零點飄移監控:培養箱使用過程中, CO2  氣壓零點會發生自然飄移現象, 這種現象不能在箱面氣體顯示框中表現出來, 實驗者也不易覺察到飄移結果細胞培養液顏色變化異常、細胞生長緩慢甚**死亡。 CO 2 氣壓零點是否飄移, 可通過CO 2 氣體測試儀, 取箱內氣體檢查確定。 如我們測試了 6 臺細胞培養箱, 它們的顯示值都為 5 %, 測試結果為 2 臺箱內外氣壓值一致, 其余 4 臺中箱內氣壓值**高 18 %, **低 0 .5%, 這些異常氣壓值培養箱影響了細胞實驗結果。 因此, 實驗室應建立CO 2 氣壓零點測試制度, 通常每 3 個月進行 1 次, 以保證 CO2氣壓實際使用值的正確。
4.培養箱飽和濕度監控 :CO2培養箱使用過程中, 要求在箱內托盤中放一定量的滅菌水(3/ 2 **全盤), 使箱內為飽和濕度環境, 這是針對開放培養細胞要求設計的。 因為飽和濕度環境可以避免培養液中 CO2 逃逸, 培養液中 pH 值穩定 , 有利于細胞生長。 實際使用過程中, 實驗者常忘記補加水, 使培養細胞處于低濕度甚**干熱環境中, 培養液 CO2  氣體易揮發, 液體pH 值升高, 影響細胞生長。 為避免此問題發生, 我們采用箱面大字警告和值日生負責制相結合的方法, 能較好地落實這一措施。 此外, 針對箱內濕熱環境易滋生細菌等問題, 我們采用在 1 000ml 水中加 2ml 新潔爾滅液, 定期用酒精和紫外線消毒箱內空氣, 培養物酒精擦拭入箱內, 以減少箱內微生物滋生速度。 實驗多時, 箱內分區存放, 培養物用筐或瓷盤存放, 這樣存取快速, 縮短開門時間 , 減少箱內氣體和濕度變化, 節省氣體,穩定了細胞生長環境。
綜上所述, 在二氧化碳培養箱使用過程中, 只要做好室溫、濕度和 CO2  氣壓零點測試糾正工作, 就能保證二氧化碳培養箱正常運行, 使它真正成為培養細胞舒適的搖藍。